| 征求意见稿 |
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| 标准草案 |
标准草案.pdf
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项目申报书 |
项目申报书.pdf
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| 基础信息 |
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| 标准性质 |
推荐性国家标准
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标准类别 |
方法 |
| 制修订 |
制定 |
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| 归口单位 |
全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会 |
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执行单位 |
全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会 |
| 主管部门 |
国家药品监督管理局 |
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| 起草单位 |
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| 北京市医疗器械检验研究院（北京市医用生物防护装备检验研究中心） |
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| 目的意义 |
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| 细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs，以下简称EVs）是由细胞释放的微/纳米级具有膜结构的小泡（如外泌体、微泡、凋亡小体等），携带蛋白质、核酸、脂质等生物活性分子，参与细胞间通讯。其用途广泛，涵盖医学、生物技术等多个领域。
EVs具有很多的特性：1）直接来自于病变细胞的EVs，相比来自于多器官分泌的传统生物标志物，特异性较高；2）EVs能够实时反映细胞状态，因此可以全面地反映疾病状态，同时也可以动态的追踪疾病的进展；3）EVs包裹母细胞来源的蛋白质、核酸、脂质等分子，可以提供多组学信息。EVs富集疾病相关分子（如肿瘤特异性突变核酸），即使含量极低也能被检测，灵敏度高；4）EVs广泛存在于血液、尿液、唾液、乳汁等体液中，可通过非侵入方式获取样本。基于以上原因，EVs已经成为重要的生物标志物。
但是，目前由于细胞外囊泡（EVs）缺乏标准化的应用，存在以下困境：
（1）EVs的自身特性
EVs的分离和纯化方法多种多样，包括超速离心、沉淀、免疫亲和捕获、尺寸排阻层析等。由于不同的方法基于不同的物理或化学原理，导致EVs亚群和污染物组成差异显著，不同方法的效率和纯度差异较大。密度梯度离心法的原理是通过颗粒的密度不同进行分离，不同实验室使用梯度介质种类（如蔗糖 vs. 碘克沙醇）、离心参数（转速、时间、温度）或样本预处理方法的差异，可能导致EVs纯度、回收率和功能分析结果不一致。如果没有统一的标准，不同研究之间的数据难以比较，甚至可能得出矛盾的结论。
对于提取后细胞外囊泡的表征也严重影响了数据的可重复性以及可比性。如：在表征EVs尺寸和浓度时，纳米颗粒追踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis, NTA）是应用比较广泛的一种技术，但其结果高度依赖于标准操作程序（SOP）的规范性和一致性。不同实验室在样本制备与稀释，仪器校准与参数设置，环境控制与操作稳定性以及数据分析方法的不同，均会造成结果无法平行比较。提取后EVs的纯度和回收率也是评估分离方法有效性的核心指标。
由于EVs的相关特性，因此在储存和运输过程中也有其特殊性。如：运输过程中的震荡、温度波动可能导致囊泡破裂或内容物泄漏；冷冻保存中，EVs的磷脂双分子层易受反复冻融损伤，需尽量减少冻融次数，并添加冻存保护剂；蛋白质和核酸标志物可能随时间降解，需低温保存，长期保存可能导致EVs聚集成团，影响下游应用（如流式检测、药物递送）等。因此需要根据下游应用优化运输和保存策略，才能最大程度维持EVs的生物活性，为疾病诊断、治疗及基础研究提供可靠保障。
以上这些挑战大多都是缺乏统一的标准化流程，导致结果的可重复性和可靠性受到影响。因此对相关流程的标准化，不仅可以提高数据的可重复性和可比性，也有利于进一步优化提取纯化技术，进而提高对于检测和诊断准确性的提升效果。
（2）精准医疗与健康中国战略的迫切需求
EVs 携带的核酸、蛋白质等分子信息可反映疾病特异性变化，在肿瘤、神经退行性疾病、心血管疾病等领域具有独特诊断价值。《“健康中国2030”规划纲要》明确提出“推动精准医疗技术研发与转化”，而标准化是技术落地的基石。通过制定 EVs 诊断试剂标准，可加快EVs诊断产品的开发上市，加速实现提升疾病早筛覆盖率、降低医疗成本的目标。
因此，针对不同方法的技术特点，建立兼顾不同方法学的国家标准，将有助于EVs相关体外诊断产品的研究、开发与评价，从而有助于为患者提供个性化的诊疗方案，在提高患者临床获益中具有重要意义。建立以临床结果一致性为导向的，不同方法学EVs检测一致性的技术标准，从而最大程度地协调方法学间的一致性问题。推动、促进行业发展，解决全行业发展的实际问题。 |
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| 范围和主要技术内容 |
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| 该系列标准分为三个部分：
其中，第1部分：细胞外囊泡体外诊断系统 提取纯化方法评价通则
范围
本文件建立了细胞外囊泡体外诊断系统的提取纯化方法评价通则。
本文件适用于实验室对于人体样品或者人细胞培养物中细胞外囊泡的提取纯化方法评价通则。
主要技术内容
1.术语和定义
包括细胞外囊泡、外泌体、凋亡小体相关术语和定义等。
2.分类
根据生物特性和形成过程不同，细胞外囊泡主要分为外泌体、微囊泡、凋亡小体等 。
细胞外囊泡来源不同，其蛋白标志物有所差异。
3. 细胞外囊泡的蛋白质标志物
详细描述各种标志物。
4. 概述
细胞外囊泡存在于多种体液中，几乎所有的细胞都能够分泌。其内部包含了多种生物活性成分，如蛋白质、核酸、脂类等。细胞外囊泡通过参与细胞间通信、细胞增殖、细胞迁移、血管新生、免疫调节等过程，对机体的生理和病理发挥着重要的调节作用。
5.指标参数
细胞外囊泡的鉴定方法，包括形态学、粒径大小分布、蛋白标志物等。
6. 附录 |
